魚肉中9類61種獸藥的快速定量檢測
來源：SCIEX
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注：可以按照客戶需求，定制特定品種、特定濃度、特定溶劑的混標(biāo)。
在現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，魚肉、雞肉、豬肉等動(dòng)物源食品在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)中往往在飼料中使用大量的抗生素來輔助預(yù)防和治療疾病。但是，這些藥物的濫用或者不恰當(dāng)?shù)氖褂每赡軙?huì)對人體造成潛在的危害。于是，獸藥殘留的問題也逐漸成為人們普遍關(guān)注的社會(huì)焦點(diǎn)。
一般情況下，建立獸藥定量方法時(shí)采用三重四級(jí)桿質(zhì)譜，然而對于前處理簡便，基質(zhì)復(fù)雜的情況下，三重四級(jí)桿選擇性具有一定的局限性，可能會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。對于高分辨質(zhì)譜而言，分子量是準(zhǔn)確測量，具有很強(qiáng)的選擇性。本文以復(fù)雜基質(zhì)魚肉為例，采用TripleTOF® 5600+建立了9類61種獸藥的快速定量分析方法，對于采用高分辨質(zhì)譜定量分析常規(guī)藥物而言具有重要的參考意義。
本方法的特點(diǎn)
1. 實(shí)驗(yàn)比較了 SWATH 2.0? 和 Scheduled MRMHR兩種技術(shù)在定量分析方面的能力；
2.簡單易行的前處理方法很大程度上提高了工作效率；
3.SWATH 2.0?和 Scheduled MRMHR 兩種技術(shù)的工作流程提供了高分辨，高靈敏和高選擇性的定量方法。
前處理方法
a. 取0.5 g（精確到0.01 g）魚肉于離心管中；
b.加入2 mL乙腈，劇烈震蕩5 min，在室溫條件下，6000 rmp離心2 min；
c.取上清液，加入2 mL正己烷震蕩2 min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復(fù)去脂一次；
d.上清液用水稀釋一倍，然后過0.22 μm濾膜上機(jī)測試；
液相條件
色譜柱：PhenomenexKinetex C18，3.0×100 mm，2.6 μm；
流動(dòng)相: A: H2O（0.1%甲酸），B: Acetonitrile；
流速： 0.4 mL /min；
進(jìn)樣體積：10 μL；
表1 液相梯度條件
質(zhì)譜條件
掃描方式：TOF MS-SWATH® MS/MSand TOF MSScheduled MRMHR；
TurboV? ESI離子源參數(shù):
氣簾氣CUR：25psi；源溫度：600 ℃；
霧化氣GAS1：55psi；輔助氣GAS2：55psi；
DP電壓：60 V； CE能量35±15 V；
IS電壓：5500V（Positive ）/ 4500 V（Negative）
化合物信息
表2 61種獸藥信息
產(chǎn)品號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | Product Name | CAS# |
1ST5725 | 左氧氟沙星 | Levofloxacine | 100986-85-4 |
1ST5758 | 雙氟哌酸 | Difloxacin | 98106-17-3 |
1ST5757 | 沙拉沙星 | Sarafloxacin | 98105-99-8 |
1ST5734 | 那地沙星 | Nadifloxacin | 124858-35-1 |
1ST4107 | 恩諾沙星 | Enrofloxacin | 93106-60-6 |
1ST5759 | 洛美沙星 | Lomefloxacin | 98079-51-7 |
1ST5738 | 諾氟沙星 | Norfloxacin | 70458-96-7 |
1ST5756 | 培氟沙星 | Pefloxacin | 70458-92-3 |
1ST4100 | 達(dá)氟沙星 | Danofloxacin | 112398-08-0 |
1ST5753 | 司帕沙星 | Sparfloxacin | 110871-86-8 |
1ST5703 | 環(huán)丙沙星 | Ciprofloxacin | 85721-33-1 |
1ST2275 | 群勃龍 | Trenbolone | 10161-33-8 |
1ST2223 | 黃體酮; 孕酮 | Progesterone | 57-83-0 |
| 福莫特羅 | Arformoterol | 67346-49-0 |
1ST2292 | 勃地酮 | Boldenone | 846-48-0 |
1ST2221 | 甲基睪酮 | 17-Methyltestosterone | 58-18-4 |
1ST2220 | 睪丸酮 | Testosterone | 58-22-0 |
1ST2274 | 19-去甲睪丸酮 | Nortestosterone | 434-22-0 |
1ST2286 | 丙酸睪丸素 | Testosterone propionate | 57-85-2 |
1ST8505 | 苯丙酸諾龍 | Nadrolonephenylpropionate | 62-90-8 |
1ST4006 | 磺胺鄰二甲氧嘧啶 | Sulfadoxine | 2447-57-6 |
1ST4014 | 磺胺二甲基嘧啶 | Sulfamethazine | 57-68-1 |
1ST4028 | 磺胺喹惡啉 | Sulfaquinoxaline | 59-40-5 |
1ST4005 | 磺胺甲基異噁唑 | Sulfamethoxazole | 723-46-6 |
1ST4034 | 磺胺氯噠嗪 | Sulfachloropyridazine | 80-32-0 |
1ST4010 | 磺胺二甲異噁唑 | Sulfisoxazole | 127-69-5 |
1ST4036 | 磺胺對甲氧嘧啶 | Sulfameter | 651-06-9 |
1ST4042 | 磺胺間二甲氧嘧啶 | Sulfadimethoxine | 122-11-2 |
1ST4040 | 磺胺間甲氧嘧啶 | Sulfamonomethoxine | 1220-83-3 |
1ST4006 | 磺胺鄰二甲氧嘧啶 | Sulfadoxine | 2447-57-6 |
1ST4017 | 磺胺嘧啶 | Sulfadiazine | 68-35-9 |
1ST4007 | 磺胺噻唑 | Sulfathiazole | 72-14-0 |
1ST4002 | 磺胺甲基嘧啶 | Sulfamerazine | 127-79-7 |
1ST1301 | 克倫特羅 | Clenbuterol | 37148-27-9 |
1ST1307 | 萊克多巴胺 | Ractopamine | 97825-25-7 |
1ST1324 | 噴布特羅 | Penbutolol | 36507-48-9 |
1ST1304 | 特布他林 | Terbutaline | 23031-25-6 |
1ST1302 | 沙丁胺醇 | Salbutamol | 18559-94-9 |
| 天青A | Azure A | 531-53-3 |
| 天青B | Azure B | 531-55-5 |
| 天青C | Azure C | 531-57-7 |
1ST7916 | 亞甲基藍(lán) | Methylene Blue trihydrate | 7220-79-3 |
1ST7301 | 孔雀石綠 | Malachite green | 2437-29-8 |
1ST7307 | 結(jié)晶紫 | Crystal Violet | 548-62-9 |
1ST7308 | 隱色結(jié)晶紫 | Leucocrystal Violet | 603-48-5 |
1ST7303D6 | 隱色孔雀石綠-D6 | Leucomalachite green D6 | 1173021-13-0 |
1ST7301D5 | 孔雀石綠-D5 | Malachite Green-D5 | 1258668-21-1 |
1ST7001 | 氯霉素 | Chloramphenicol | 56-75-7 |
1ST2256 | 醋酸氟氫可的松 | Fludrocortisone 21- acetate | 514-36-3 |
1ST2226 | 氫化可的松 | Hydrocortisone | 50-23-7 |
1ST2218 | 地塞米松 | Dexamethasone | 50-02-2 |
1ST2232 | 倍氯米松 | Beclomethasone | 4419-39-0 |
1ST2230 | 倍他米松 | Betamethasone | 378-44-9 |
1ST2227 | 潑尼松 | Prednisone | 53-03-2 |
1ST2225 | 潑尼松龍 | Prednisolone | 50-24-8 |
1ST7202B | β-玉米赤霉烯醇 | β-Zearalenol | 71030-11-0 |
1ST7203 | 玉米赤霉酮 | Zearalanone | 5975-78-0 |
1ST7202 | α-玉米赤霉烯醇 | α-Zearalenol | 36455-72-8 |
1ST000631 | 玉米赤霉醇 | Zeranol | 55331-29-8 |
1ST7204 | 玉米赤霉烯酮 | Zearalenone | 17924-92-4 |
1ST7201B | β-玉米赤霉醇 | β-Zearalanol | 42422-68-4 |
提取離子色譜圖
添加在魚肉基質(zhì)中100 ppb的獸藥混標(biāo)，一針進(jìn)樣子離子提取色譜圖：
線性范圍、準(zhǔn)確度、回收率等
基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度在0.2～200 ng/mL范圍內(nèi)，所有獸藥的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.99，線性相關(guān)性良好；并且準(zhǔn)確度均在89.3% ～114.1%之間；添加5、10、50、50、100 ng/mL回收率均在78.2% ～105.2%之間。
本方法的優(yōu)勢
小結(jié)
本實(shí)驗(yàn)前處理方法簡單易行，很大程度上提高了工作效率；SAWTH?數(shù)據(jù)絕對響應(yīng)值比MRMHR大，但是MRMHR的信噪比大，選擇性更強(qiáng)；對于SWATH®而言，不需要增加Cycle Time，能保證所有的化合物均采集到高質(zhì)量的二級(jí)質(zhì)譜圖，并且溯源性較強(qiáng)；對于MRMHR而言，必須要預(yù)先得到目標(biāo)物的保留時(shí)間，并且需要把目標(biāo)物的保留時(shí)間和質(zhì)荷比輸入到列表中，如果化合物種類較多，工作效率較低，而SWATH®不需要預(yù)先輸入保留時(shí)間和質(zhì)荷比，對于多殘留分析，大大提高了工作效率；本文對于采用高分辨質(zhì)譜定量分析常規(guī)藥物而言具有重要的參考意義。
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